Resumo. O consumo crescente de queijos e a escassez de coalhos incentivam a busca por novas fontes de enzimas coagulantes do leite. Aspergillus sp. têm se destacado por sintetizarem coagulantes com características bioquímicas para uso na produção de queijo. O objetivo deste trabalho foi avaliar parâmetros biológicos e físicos que influenciam na produção de coagulante por uma espécie de Aspergillus e avaliar a toxicidade do extrato bruto. Aspergillus flavo-furcatis DPUA 1461 da Coleção de Culturas DPUA, da Universidade Federal do Amazonas, foi cultivado em ágar Czapek, extrato de levedura e peptona, em placas de Petri, a 25 ºC por sete dias. Na fermentação em estado sólido foram utilizados resíduos de açaí e casca de cupuaçu suplementados com farelo de arroz. Um planejamento fatorial completo 23 foi realizado para avaliar a influência da idade e tamanho do inóculo e tempo de fermentação na produção de enzimas proteolíticas e de coagulante. A razão coagulante foi determinada. A toxicidade dos extratos foi avaliada utilizando Artemia salina e fibroblastos humanos. A. flavo-furcatis DPUA 1461 produziu proteases com máxima atividade (65,5 U/mL) com inóculo 10% (v/v), em 5 dias a 120 h de FES. A máxima produção de coagulante (656,7 U) foi observada no inóculo (10%), em 288h de fermentação e inóculo de 10 dias. A elevada razão coagulante (15,5) foi obtida com inóculo de 3%, 10 dias e 288h de bioprocesso. Resíduos lignocelulósicos amazônicos são substratos eficazes para a produção de coagulante com potencial para uso na produção de queijo por Aspergillus flavo-furcatis DPUA 1461.